KONSTRUKSI VEKTOR REKOMBINAN pRGEB32-sgRNA UNTUK MENGEDIT GEN ART1 PADA PADI DENGAN TEKNIK CRISPR/Cas9 UNTUK MENUNJANG KETAHANAN PANGAN

Produksi padi mengalami penurunan pemenuhan kebutuhan mencapai 2,05% pada tahun 2023, terutama disebabkan oleh berkurangnya lahan subur untuk penanaman padi. Oleh karena itu, diperlukan upaya untuk meningkatkan proudksi padi melalui pengembangan varietas padi yang beradaptasi pada lahan suboptimal seperti laham masam. Untuk mendukung upaya tersebut, diperlukan studi fungsional gen yang terlibat dalam toleransi padi terhadap tanah masam dan cekaman alumunium. Penelitian ini bertujuan untuk: 1. mengonstruksi vektor pRGEB32 rekombinan dengan sgRNA dari gen ART1 dan mengintroduksikannya ke sel bakteri E .coli strain TOP10 dan A.tumefaciens, 2. serta menganalisis ekspresi gen toleransi alumunium pada protoplas yang diintroduksi vektor pRGEB32 rekombinan dengan sgRNA dari gen ART1. Konstruksi vektor
rekombinan CRISPR/Cas9 dilakukan degan teknik Golden Gate cloning, kemudian vektor rekombinan diintroduksikan ke sel bakteri E. coli TOP10 dan A. tumefaciens dengan metode kejut panas. Plasmid rekombinan juga diintroduksikan ke protoplas dengan teknik elektroforasi untuk selanjutnya dilakukan analisis ekspresi gen menggunakan teknik RT-qPCR. Hasil percobaan menunjukkan bahwa vektor rekombinan pRGE32-sgRNA ART1 Berhasil dikonstruksi dan telah diverifikasi menggunakan teknik PCR koloni dan gel elektroforesis yang menghasilkan pita DNA berukuran 430bp. Hasil amplifikasi DNA kemudian disekuen dan menunjukkan bahwa sgRNA berhasil disisipkan ke dalam vektor pRGEB32. Analisis ekspresi gen menunjukkan bahwa gen art1 mutan pada porotplas terekspresi rendah dan berbeda signifikan dengan kontrol yang membuktikan bahwa gen telah mengalami pengeditan. Penelitian ini dapat menjadi dasar untuk membuat kultivar unggul padi toleran alumunium.